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        光復(fù)新聞

        革蘭氏染色法的操作步驟

        發(fā)布日期:2021/07/20


        革蘭氏染色法,是指細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法,屬于復(fù)染法。

        革蘭氏染色法的染色原理:通過(guò)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后,在細(xì)菌細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物,再用95%乙醇脫色。

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        革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟,未經(jīng)染色的細(xì)菌,由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難區(qū)別。經(jīng)染色后,陽(yáng)性菌呈紫色,陰性菌呈紅色,可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征,從而用以分類鑒定。

        具體操作方法是:
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        (1)制片。
        取菌種培養(yǎng)物常規(guī)涂片、干燥、固定。 
        要用活躍生長(zhǎng)期的幼培養(yǎng)物作革蘭氏染色;涂片不宜過(guò)厚,以免脫色不完全造成假陽(yáng)性;火焰固定不宜過(guò)熱(以玻片不燙手為宜)。 

        (2)初染。
        滴加結(jié)晶紫(以剛好將菌膜覆蓋為宜)染色1-2min,水洗。

        (3)媒染。
        用碘液沖去殘水,并用碘液覆蓋約1min,水洗。 

        (4)脫色。
        用濾紙吸去玻片上的殘水,將玻片傾斜,在白色背景下,用滴管流加95%的乙醇脫色,直至流出的乙醇無(wú)紫色時(shí),立即水洗。 
        乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié):脫色不足,陰性菌被誤染成陽(yáng)性菌;脫色過(guò)度,陽(yáng)性菌被誤染成陰性菌。因而脫色時(shí)間一般為20-30s。
         
        (5)復(fù)染。
        用番紅液復(fù)染約2min,水洗。

        (6)鏡檢。
        干燥后,用油鏡觀察。菌體被染成藍(lán)紫色的是革蘭氏陽(yáng)性菌,被染成紅色的為革蘭氏陰性菌。 


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