發(fā)布日期:2021/04/28
Tris緩沖液作為一種生物緩沖試劑,一直在生物化學(xué)研究中發(fā)揮著很大的作用。Tris生物緩沖液的用途非常廣泛。它可在凝膠中采用Tris HCl緩沖體系以更好的穩(wěn)定pH值;也能與甘氨酸構(gòu)成緩沖體系在電泳緩沖液里穩(wěn)定PH值;而且能作為核酸和蛋白質(zhì)的溶劑。根據(jù)Tris緩沖液的低離子強度特點,對于形成線蟲的中間纖維起到助力的作用。另外滴加EDTA后的Tris鹽酸緩沖液能夠用于DNA的穩(wěn)定和存儲;核酸電泳實驗中一般常用到TAE緩沖液和TBE緩沖液,這是調(diào)節(jié)Tris Hcl溶液的PH值,然后替換成乙酸和硼酸獲得的兩種緩沖液。
Tris-HCl緩沖液:pH = 7.5 ~ 8.5;三磷酸緩沖液:pH = 5.0 ~ 9.0。
除TRIS - hcl外,TRIS還有多種衍生化緩沖液:
TBS緩沖液=Tris-HCl+ NaCl+KCl,常用來清洗免疫染色組織或Western blotting中的Western blotting膜;
TBST緩沖液=Tris-HCl+NaCl+tween20,一種常用于Western Blotting的膜緩沖液;
TE緩沖液=Tris-HCl+EDTA,對DNA堿基具有保護作用,常用于DNA的穩(wěn)定和儲存;
TAE緩沖液=Tris堿+乙酸+EDTA,是一種廣泛應(yīng)用于短片段DNA電泳的緩沖體系;
TBE緩沖液=三堿基+硼酸+EDTA,適用于長期DNA電泳,對小片段有較好的分離效果。
Tris緩沖液的優(yōu)點: ①因為Tris堿的堿性較強,所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;②對生物化學(xué)過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。
Tris緩沖液使用時需注意:①緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1;②溫度效應(yīng)大,溫度變化對緩沖液pH值的影響很大,所以一定要在使用溫度下進行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃。 ③易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴密封。④此緩沖液對某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用,所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。
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